在甲醇中固定6h,RNA的产量最高,在室温下固定48h,体积分数为0.1的甲醛的产量最低,回答:和甲醛固定组织保存的时间有关,预固定问题在做科研或临床工作时,很多花可能会习惯性地使用4多聚-2/对标本进行预固定,这可能有三个目的:1,很多研究生做实验的时候可能会让他们用多聚甲醛固定,有的可能是为了长时间保存样本,多聚甲醛固色真是老生常谈。
1、用 4% 多聚 甲醛固定的活体组织还能不能进行RT-PCR检测?回答:和甲醛固定组织保存的时间有关。个人认为,如果不超过半个月,应该还是可以做到的。如果时间太长,可能就不行了。参考文献名称:标本固定对总RNA和病毒RNA的影响作者和单位:何丽萍孟易,湖南湘南学院流行病学与卫生统计系,武汉大学公共卫生学院解剖系摘要:目的:探讨固定液固定时间和温度对RNA病毒感染组织中总RNA的完整率和病毒RNA扩增的影响。
RNA产量的因子分析结果表明,在固定时间和固定温度下,不同固定剂固定的组织中RNA产量存在显著差异,且二者之间存在显著互作。在甲醇中固定6h,RNA的产量最高,在室温下固定48h,体积分数为0.1的甲醛的产量最低。固定后标本的巢式RT-PCR显示,体积分数为0.1的甲醛固定48h后扩增结果不稳定,其他所有固定方法均可扩增出特异性条带。与甲醛相比,用甲醇、乙醇和丙酮固定的样品中扩增产物的电泳条带更亮,灰度值更高(P0.01)。
2、 多聚 甲醛固定后利用多聚甲醛固色真是老生常谈。很多研究生做实验的时候可能会让他们用多聚甲醛固定,有的可能是为了长时间保存样本。于是就口耳相传了。预固定问题在做科研或临床工作时,很多花可能会习惯性地使用4多聚-2/对标本进行预固定,这可能有三个目的:1。灭活标本中可能存在的微生物、细菌和病毒,起到安全的作用。
3细胞内染色前的准备。但可能被很多人忽略的是,如果样本在染色前用多聚-2/固定,固定后细胞表面某些位点的构象发生变化,使抗体无法结合产生假阴性,还可能因固定导致其他位点的非特异性结合假阳性,所以,在染色前知道哪些抗体不能预固定是非常重要的。幸运的是,我们不需要自己做验证,在Biolegend的网站上,有爱心的技术人员为我们做了一系列的测试。下面两个表,一个是人抗原,一个是小鼠抗原,可以看出大部分不能预先固定的抗体都是趋化因子受体,所以在实验中一定要注意不要先固定再染色。