多聚甲醛固定，01triton x100作用

1，01triton x100作用

triton X-100是非离子型表面活性剂，在4%多聚甲醛固定过程中起着增加细胞膜通透性的作用！

01triton x100作用

2，4多聚甲醛固定细胞后膜蛋白能结合抗体吗

应该不能。细胞固定后已死亡，蛋白质也变性，抗体也就无法识别了。

瞎说，免疫组化，免疫荧光都是固定了以后加抗体的

应该不能吧。

4多聚甲醛固定细胞后膜蛋白能结合抗体吗

3，多聚甲醛固定细胞爬片37度要多久

4度冰箱存放的时间一般不超过1个月，而且得因细胞的抗原性而异，有的细胞涂片，如病毒感染的细胞，都不宜放在4℃。建议最好放在－20℃，要存放更长时间的应放在－80℃。用时再取出，于室温自然解冻。

先清洗细胞，尽量吸尽液体，加入4%多聚甲醛，室温固定10-15min。我一直都是这么做的，你要是觉得时间短也可以20min。

多聚甲醛固定细胞爬片37度要多久

4，组织在多聚甲醛中放多久

甲醛、多聚甲醛这些固定液的固定时间是不能太久的，一般24-48小时足够了。如果固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露（也就是说你在做组化或者免疫荧光时抗原修复这一步骤没有用了）。这种组织做出来的结果，要么得不到阳性，要么各种假阳性。但是做HE或者其他不涉及抗原抗体结合的染色还是可以的。

使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48hours,固定时间太久组织会变脆如果是在温度4°以下最多可以放一个月，但是肯定会损失抗原的

5，细胞爬片具体步骤是什么

单位实验室做过，小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的，实验效果不错.细胞免疫荧光步骤：1.细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。爬片可以在培养皿六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。一为节约经费（培养皿可以重复利用）二来觉得培养皿口大，操作比较方便。培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子具体操作是：用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量）取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基（以使玻片与培养皿紧密接触），将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。最后盖上培养皿置于37度5％CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况，24小时或更长时间适时取出爬片。爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了做好的细胞爬片可以放在－20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；3.PBS漂洗5min；4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；5.PBS漂洗2次，每次5min；6.1%BSA封闭30min；7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；8.PBS漂洗2次，每次5min；9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h；10.PBS漂洗2次，每次5min；11.5ug/ml DAPI染色2min；12.抗淬灭封片剂封片。抗淬灭封片剂:2.5% DABCO (w/v)50mM Tris(pH8.0)90%甘油

先清洗细胞，尽量吸尽液体，加入4%多聚甲醛，室温固定10-15min。我一直都是这么做的，你要是觉得时间短也可以20min。